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PCR耗材知識大科普,你想了解嗎
發(fā)布日期:2022/11/1 9:54:34
PCR是一種敏感和有效的方法,用于在短時間內將單拷貝的目標DNA序列擴增至數(shù)百萬拷貝。

因此用于PCR反應的塑料耗材必須避免存在污染物和抑制劑,同時又具有可保障最佳PCR效果的高質量。

01

塑料耗材組成

材料

PCR / qPCR耗材通常由聚丙烯制成,因為它是惰性的并且能夠承受熱循環(huán)過程中溫度的快速變化。聚丙烯的惰性性質使其對于反應物質的吸收降低至最小,確保獲取最佳的PCR結果。為了進一步保障在純度和生物兼容性方面的批次間一致性,應當在生產過程中使用全新未循環(huán)使用的醫(yī)學級或分子生物學級高品質聚丙烯原料。請注意,某些PCR / qPCR板邊框用更強的聚碳酸酯框 制成,以與高通量機器人應用兼容。

顏色

PCR管和板通常可提供多種不同的顏色形式,以便于對于樣品的視覺區(qū)分和鑒別,特別是在高通量實驗中。盡管耗材的顏色對DNA擴增沒有影響,但在設置實時PCR或qPCR 的反應時,與透明耗材相比,我們更推薦使用白色耗材,以實現(xiàn)靈敏和準確的熒光檢測。

白色耗材通過阻止熒光折射出管(圖2A)來提高qPCR數(shù)據(jù)的靈敏度和一致性。折射被最小化時,更多的信號被反射回檢測器,從而增加信噪比(圖2B)。此外,白色管壁可阻止熒光信號傳遞至PCR儀模塊,避免被吸收或不一致地反射熒光信號,從而使重復實驗(圖1B)中的差異降至最低。在極少數(shù)情況下,如果熒光探測器由于白色孔的信號反射增強而過飽和,可以使用磨砂孔替代。

02

生產概況

防止灰塵和生物學污染物

為了避免可干擾DNA擴增的污染,PCR/qPCR塑料耗材應不含核酸酶和DNA的污染。盡管如高壓和輻射等滅菌方法可去除細菌和DNA酶,但這些方法并不能去除灰塵和DNA殘留。殘留的灰塵客戶可能會抑制PCR,而片段化的DNA依然可作為模板從而產生非特異性的擴增。

因此,在生產這些塑料耗材時,從制模到最終的包裝都必須在具有顆粒數(shù)量限制的設施環(huán)境中進行。例如,100,000級潔凈室允許在立方英尺空氣中不超過100,000個直徑≥0.5μm的顆粒。這些類型的設施符合國際標準化組織(如ISO 9001 )規(guī)定的嚴格指導原則,以防止灰塵和生物污染。

質量保證檢驗

為了確保質量,生產商可能需要對PCR/qPCR塑料耗材進行視覺或物理檢驗其完整性,以確保對于反應成分保護。可以執(zhí)行物理測試來評估樣品孔的蒸發(fā),密封和電連續(xù)性以檢查泄漏。對于生物測試,塑料耗材會進行某些DNA目標分子的qPCR擴增,以評估核酸酶和人類DNA的污染。生產商對于經歷過這些嚴格檢驗的PCR/qPCR塑料耗材可提供相應的檢測報告書。

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